ВРЕМЕННОЕ НАСТАВЛЕНИЕ

МИНИСТЕРСТВО
СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
(Минсельхозпрод России)

ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ

17.08.98г. n i3-7-2/i360

ВРЕМЕННОЕ НАСТАВЛЕНИЕ
по применению набора реагентов для
количественного определения тесто-
стерона в продуктах животного про-
исхождения методом иммунофермент-
ного анализа ( ИФА-АФ-ТЕСТ.)
(В порядке широкого производствен-
ного испытания на 1000000 исследо-
ваний до 2001 года)

1. НАЗНАЧЕНИЕ

Контроль качества продуктов животного происхождения ветеринарной
службой является одним из важнейших профилактических мероприятий по
сохранению здоровья нации. При оценке качества продуктов питания жи-
вотного происхождения, одним из важнейших показателей является конт-
роль уровня стероидных гормонов - мощнейших регуляторов обмена веществ
в организме.

Причиной этого является их способность длительное время сохра-
няться в замороженных продуктах животного происхождения, выдерживать
термическую обработку и свободно всасываться из содержимого желудоч-
но-кишечного тракта. Стероидные гормоны не обладают видовой специфич-
ностью, поэтому, попадая в организм человека, они активно вмешиваются
в межгормональные взаимоотношения, нарушая тем самым присущий данному
организму обмен веществ, влияя на проявление половых признаков и поло-
вую функцию организма.

В современном промышленном животноводстве, птицеводстве и рыбо-
водстае прм интенсивных технологиях выращивания животных, в нарушение
технологических регламентов, часто прибегают к незаконному использова-
нию гормональных стимуляторов роста. Использование препаратов данного
класса строго контролируется в развитых странах уполномоченными орга-
нами государственного надзора. Для этого в мировой практике активно
используют экспресс-методы контроля безопасности пищевых продуктов,
среди которых лидирующее положение занял иммуноферментный метод анали-
за. В США и некоторых странах ЕЭС методы иммуноферментного анализа
продуктов животного происхождения доведены до статуса национальных
стандартов.

В России из-за отсутствия эффективных, высокопроизводительных и
простых в исполнении методов количественного определения стероидных
гормонов до настоящего времени не осуществлялся эффективный контроль
за содержанием гормональных препаратов в целом перечне продуктов жи-
вотного происхождения, как отечественного, так и, в особенности, им-
портного производства.

ПЕРЕЧЕНЬ ПРОДУКТОВ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ПОДЛЕЖАЩИХ
ИССЛЕДОВАНИЮ НА СОДЕРЖАНИЕ ТЕСТОСТЕРОНА.

1. Мясо: свежее, охлажденное и мороженое конины, говядины, сви-
нины, баранины, козлятины, кролика, мясо других видов, блоки, мясные
полуфабрикаты.

2. Мясо птицы: свежее, охлажденное и мороженое кур, уток, гусей,
индеек, перепелов, индеек тяжелых кроссов.

3. Колбасы и кулинарные изделия из мяса (говядины, свинины, бара-
нины, конины, субпродуктов) м птицы: колбасы сырокопченые, колбасы по-
лукопченые, колбасы варено-копченые, колбасы вареные, сосиски, сар-
дельки, колбасы и колбаски вареные для школьного питания из мяса и
птицы, колбасы ливерные, колбасы кровяные, зельцы, паштеты, студни,
соусы, мясные вареные, жареные,запеченные и копчено-запеченные продук-
ты.

4. Консервы из мяса и птицы, консервы мясо-растительные.

5. Субпродукты сельскохозяйственных животных и птиц.

6. Полуфабрикаты.

7. Масло коровье, жиры животные.

8. Яйца и изделия пишевые на яичной основе.

9. Рыба и рыбопродукты, рыбные консервы.

10. Молоко, сливки, кисломолочные изделия, консервы молочные, мо-
локо и молочные изделия сухие, сыры и творожные изделия, мороженое.

Разработанный ИфА-метод предназначен для решения проблемы массо-
вого рутинного контроля за содержанием тестостерона, в том числе и на
продуктовых рынках.

В основе количественного определения тестостерона в продуктах жи-
вотного происхождения лежит конкурентный вариант твердофазного иммуно-
ферментного анализа. Принцип метода основан на конкуренции между ад-
сорбированным на поверхности лунок планшета тестостероном и свободным
(в калибровочной пробе или анализируемом образце) тестостероном за ак-
тивные центры связывания аффинных антител к тестостерону, меченых пе-
роксидазой. В результате иммуноспецифической реакции между антителами
к тестостерону и самим тестостероном, содержащимся в пробах (стандарты
или образцы) и на поверхности лунок планшета образуются комплексы ан-
титела-тестостерон. Комплекс антиген-антитело, не связанный с поверх-
ностью планшета, удаляют путем промывки.

В результате ферментативной реакции пероксидазы с перекисью водо-
рода субстратного раствора происходит окрашивание 3,3',5,5'- тетраме-
тилбензидина (ТМВ) в синий цвет. Интенсивность окраски обратно пропор-
циональна содержанию тестостерона а анализируемом образце. Реакцию ос-
танавливают добавлением серной кислоты, вызывающей смену окраски с си-
ней на ярко желтую. Результаты реакции оцениваются на спектрофотометре
вертикального сканирования при длине волны 450 нм.

2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

2.1. Набор расчитан на проведение анализа (6 калибровочных проб и
14 неизвестных проб а дубликатах на каждом планшете).

2.2.Состав набора:

1.Планшет 96-луночный с адсорбированным антигеном - 1(2)шт

2.Калиброванные стандарты тестостерона (бесцветная или
желтоватая прозрачная жидкость по 0,5 мл):

а) Стандарт О нг/мл - 1 фл.

б) Стандарт 0,5 нг/мл - 1 фл.

в) Стандарт 1,5 нг/мл - 1 фл.

г) Стандарт 5,0 нг/мл - 1 фл.

д) Стандарт 15,0 нг/мл - 1 фл.

е) Стандарт 50,0 нг/мл - 1 фл.

3. Конъюгат аффинных антител к тестостерону и - 1 фл.
пероксидазы из корня хрена ( жидкость красного или
желтоватого цвета - 1,5 или 3 мл)

4. Калиброванный раствор тестостерона - 30 мкг/мл - 1 фл.
(бесцветная или желтоватая прозрачная жидкость - 3 или 6 мл)

5. Калиброванный раствор тестостерона - 30 нг/мл) - 1 фл.
(бесцветная или желтоватая прозрачная жидкость(3 мл)

6. Растворитель для анализируемых проб - 1 фл.
(бесцветная прозрачная жидкость - 30 или 60 мл)

7. Буфер для анализа n 1 ( жидкость красного или - 1 фл.
желтоватого цвета - 3 или 6 мл)

8. Буфер для анализа n 2 ( жидкость красного или - 1 фл
желтоватого цвета - 1,5 или 3 мл)

9. ФСБР - фосфатно-солевой буферный раствор с - 1 фл.
детергентом, 20-кратный концентрат (бесцветная прозрачная
жидкость - 25 или 50 мл)

10. 3,3',5,5'- тетраметилбензидин (ТМВ) - 1 фл.
(прозрачная жидкость голубоватого цвета -2,2 или 4,4 мл)

11. Субстратный раствор (бесцветная прозрачная жидкость - - 1 фл.
8,8 или 17,6 мл)

12. Стоп-реагент (серная кислота, 2н) - 1 фл.
(бесцветная прозрачная жидкость - 11 или 22 мл)

2.3.Маркировка.

2.3.1. На каждый флакон с компонентом должна быть наклеена эти-
кетка с указанием: наименования предприятия-изготовителя и его товар-
ного знака, названия набора, названия реагента, способа подготовки к
работе ( для отдельных компонентов), условий хранения, срока годности,
номера серии, объема реагента, надписи "Только для "ин витро" диагнос-
тики" , содержания тестостерона (для калиброванных стандартов и раство-
ров) .

2.3.2. На каждую коробку должна быть наклеена этикетка с указани-
ем: наименования предприятия-изготовителя и его товарного знака, наз-
вания набора, состава набора, надписи "Только для "ин витро" диагнос-
тики", условий хранения, срока годности, номера серии, номера настоя-
щих технических условий. В коробку вкладывают наставление по примене-
нию.

3.ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

3.1. Транспортирование наборов производят в соответствии с ОСТ
08064-19-07 всеми видами крытого транспорта при температуре от 2 до 8 С
Допускается транспортирование наборов при температуре до 25° С в тече-
ние 1 сут.

3.2. Наборы хранят при температуре от 2 до 8°С в течении всего
срока годности. Допускается хранение набора при температуре до 25гр.С
не более 1 сут.

3.3. Срок годности набора - 6 мес. со дня изготовления.
Датой изготовления набора считают дату его комплектации.

4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

4.1. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые
или пластиковые перчатки, так как исследуемый материал является потен-
циально инфицированным, способным длительное время сохранять и переда-
вать бактериальные или вирусные инфекции.

4.2. Химическая посуда и оборудование, которые используются в ра-
боте с набором, должны быть соответствующим образом маркированы и хра-
ниться отдельно.

4.3. Запрещается прием пищи, использование косметических средств
и курение в помещениях, предназначенных для работы с наборами.

5. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

5.1. ПРОМЫВОЧНЫЙ БУФЕР

Перед использованием добейтесь полного растворения солей фосфат-
но-солевого буферного раствора (ФСБР) путем прогревания флакона в го-
рячей воде. Смешайте необходимое для работы количество ФСБР с дистил-
лированной водой в следующей пропорции: 1 часть ФСБР + 19 частей дистиллиро-
ванной воды. Неиспользованный ФСВР храните при +4°С.

5.2. КОНЪЮГАТ

Рабочий раствор Конъюгата готовится непосредственно перед исполь-
зованием и хранению, в отличие от исходного раствора, не подлежит.

Для работы на целом планшете требуется 5 мл рабочего раствора
Конъююгата. В зависимости от количества анализируемых проб, смешайте
Буфер для анализа n1, Буфер для анализа n2 и Конъюгат в соотношении
2:1:1. Оставшиеся не использованными исходные растворы Конъюгата и Бу-
фера для анализа n1 и n2 храните при + 4° С.

5.3. СТАНДАРТЫ И КАЛИБРОВАННЫЕ РАСТВОРЫ
Перед использованием стандарты, калиброванные растворы и раствори-
тель для анализируемых проб следует прогреть для размораживания раст-
ворителя. Чистыми наконечниками перенесите по 60 мкл каждого стандарта
и анализируемого образца в предварительно маркированные флаконы и до-
бавьте по 390 мкл Промывочного буфера, перемешайте и используйте в
ИФА. Исходные растворы храните при +4° С.

5.4. ХРОМОГЕН

Смешайте содержимое флаконов ТМБ и субстратного раствора в соотно-
шении: 1 часть раствора ТМВ и 4 части субстратного раствора, переме-
шайте.Для работы с растворами хромогена необходимо использовать только
чистую посуду и чистые наконечники.(Раствор готовится непосредственно
перед употреблением). Оставшиеся неиспользованными растворы храните
при + 4°С.

6.ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА

Для определения. истинной концентрации гормонов в каждом исследуе-
мом образце необходимо оценить процент выхода, дополнительно вносимых
стероидов. Для этого каждый образец пробы исследуется как в чистом ви-
де, так и с добавкой определяемого гормона. Во всех случаях, для ана-
лиза 1 исследуемой пробы, необходимо одновременно исследовать 2 пробы
того же образца с добавками калиброванных растворов тестостерона, вно-
симых внутрь образца до гомогенизации (экстракции) и в после экстрак-
ции.
Все работы по экстракции исследуемых образцов необходимо проводить в
вытяжном шкафу.

ПРОДУКТЫ ИЗ МЯСА,ПТИЦЫ,РЫБЫ.

1. Берется усредненная навеска из разных мест исследуемого образ-
ца массой 40 г, которая делится на 2 части по 20 г каждая. В одну из
частей вносится 20 мкл калиброванного раствора тестостерона, содержа-
щего 30 мкг/мл гормона для оценки эффективности экстракционной проце-
дуры.

2. Исследуемые пробы тщательно гомогенизируются до мелкодисперс-
ного состояния в 40 мл 0,1 n раствора соляной кислоты каждая.

3. По 3 г полученных гомогенатов переносят в полиэтиленовые про-
бирки и добавляют тройной по отношению к гомогенату объем дизтилового
эфира (9 мл), плотно закрывают крышками, тщательно встряхивают в тече-
ние 5-10 минут и выдерживают в морозильной камере или сухом льде до
замерзания водной (нижней) фазы.

4.Прозрачную эфирную фазу каждого образца аккуратно сливают в
пенициллиновые флаконы и выпаривают досуха на водяной бане с темпера-
турой воды +37° С в вытяжном шкафу (необходимо следить, чтобы эфир не
выплескивался).

5. К прогретым (+56° С) сухим остаткам экстрактов добавляют по 1
мл растворителя для анализируемых проб. Пробы тщательно перемешивают в
течение 2-3 минут и охлаждают 15 минут при +4° С.

6. Очистка образцов от жира производится путем фильтрации через
бумажные фильтры.

7. Пронумеруйте 3 чистых флакона: 1- x1 ; 2- y1; 3- z1.

- в 1-й внесите 60 мкл фильтрата, полученного после экстракции
нативного анализируемого образца (x1);

- во 2-й внесите 60 мкл фильтрата анализируемого образца с добав-
кой гормона, внесенного до экстракции (y1) ;

- в 3-й (z1) внесите 60 мкл фильтрата, полученного после экстрак-
ции нативного анализируемого образца (x1); сюда же добавьте 60 мкл ка-
либрованного раствора тестостерона, содержащего 30 нг/мл гормона ;

- в 1 и 2 флаконы внесите по 390 мкл Промывочного буфера, в 3-й
внесите 330 мкл Промывочного буфера, осторожно встряхните флаконы и
используйте растворы в ИФА.

Жиры животного происхождения

1. Берется усредненная навеска из разных мест исследуемого образ-
ца массой 40 г, которая делится на 2 части по 20 г каждая. Пробы меха-
нически измельчаются и растапливаются. В одну из частей, вносится 200
мкл калиброванного раствора исследуемого стероида: (ЗО мкг/мл) для
оценки эффективности экстракционной процедуры. Пробы тщательно встря-
хиваются.

2. По 200 мг полученных подогретых до жидкого состояния гомогена-
тов переносят пипеткой а полиэтиленовые пробирки и добавляют по 2 мл
дизтилового эфира, плотно закрывают крышками, тщательно встряхивают в
течение 5-10 минут и выдерживают в морозильной камере- или сухом льде
до замерзания водной (нижней) фазы.

3.Прозрачную эфирную фазу каждого образца сливают в пенициллино-
вые флаконы и выпаривают досуха на водяной бане с температурой воды
+37° С в вытяжном шкафу (необходимо следить, чтобы эфир не выплески-
вался) .

4. К прогретым (+56° С) сухим остаткам экстрактов добавляют по 2
мл растворителя для анализируемых проб, пробы тщательно перемешивают в
течение 2-3 имнут и охлаждают 15 минут при +4° С.

5. Очистка образцов от жира производится путем фильтрации через
бумажные фильтры. Фильтраты используются в ИФА.

6. Пронумеруйте 3 чистых флакона: 1-x1; 2- y1; 3- z1 .

- в 1-и внесите 60 мкл фильтрата, полученного после экстракции
нативного анализируемого образца (x1);

- во 2-й внесите 60 мкл фильтрата анализируемого образца с добав-
кой гормона, внесенного до экстракции (y1) ;

- в 3-й (z1) внесите 60 мкл фильтрата, полученного после экстрак-
ции натмвного анализируемого образца (x1); сюда же добавьте 60 мкл ка-
либрованного раствора тестостерона, содержащего 30 нг/мл гормона ;

Молоко и кисломолочные продукты

1. Берутся в стеклянные виалы 2 навески образцов массой по 60 г
(мл) каждая, прогреваются при +37° С в течение 30 минут. В одну навес-
ку вносится 20 мкл калиброванного раствора тестостерона (30 мкг/мл)
для оценки эффективности экстракционной процедуры. Пробы тщательно
встряхиваются.

2. По 3 г(мл) полученных гомогенатов переносят в полиэтиленовые
пробирки и добавляют тройной по отношению к гомогенату объем дизтило-
вого эфира (9 мл), плотно закрывают крышками, тщательно встряхивают в
течение 5-10 минут и центрифугируют в течение 15 минут при ЗОООg, а
затем выдерживают в морозильной камере или сухом льде до замерзания
водной (нижней) фазы.

3.Прозрачную эфирную фазу каждого образца аккуратно сливают в
пенициллиновые флаконы и выпаривают досуха на водяной бане с темпера-
турой воды +37° С в вытяжном шкафу (необходимо следить, чтобы эфир не
выплескивался).

4. К прогретым (+56° С) сухим остаткам экстрактов добавляют по 1
мл растворителя для анализируемых проб. Пробы тщательно перемешивают в
течение 2-3 минут и охлаждают 15 минут при +4° С.

6. Пронумеруйте 3 чистых флакона: 1- x1; 2- y1; 3- z1.

- в 1-й внесите 60 мкл фильтрата, полученного после экстракции
нативного анализируемого образца (x1);

- во 2-й внесите 60 мкл фильтрата анализируемого образца с добав-
кой гормона, внесенного до экстракции (y1) ;

7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

7.1. Порядок маркировки планшета и внесения образцов приведен на
схеме. Время внесения образцов в лунки одного планшета не должно пре-
вышать 15 мин.

7.2. Вскрыть упаковку со стрмпами (с планшетом) и внести во все
используемые для работы лунки по 300 мкл Промывочного буфера .

7.3. Удалите содержимое переворачиванием планшета или отсасывани-
ем так, чтобы в лунке не осталось жидкости.

7.4. В лунки 1,2 ряда А внести по 150 мкл калибровочной пробы,
содержащей Стандарт 0 нг/мл.

7.5. В лунки 1,2 ряда В внести по 150 мкл калибровочной пробы,
содержащей Стандарт 0,5 нг/мл.

7.6. В лунки 1,2 ряда С внести по 150 мкл калибровочной пробы,
содержащей Стандарт 1,5 нг/мл.

7.7. В лунки 1,2 ряда d внести по 150 мкл калибровочной пробы,
содержащей Стандарт 5,0 нг/мл.

7.8. В лунки 1,2 ряда Е внести по 150 мкл калибровочной пробы,
содержащей Стандарт 15,0 нг/мл.

7.9. В лунки 1,2 ряда f внести по 150 мкл калибровочной пробы,
содержащей Стандарт 50,0 нг/мл.

7.10.В лунки 1,2 ряда g внести по 150 мкл образца из флакона x1.

7.11.В лунки 1,2 ряда Н внести по 150 мкл образца из флакона y1

7.12.8 лунки 3,4 ряда А внести по 150 мкл образца из флакона z1.

7.13. Во все используемые лунки планшета поверх растворов стан-
дартов и анализируемых проб внести по 50 мкл раствора Конъюгата.

7.14. Планшет закрыть крышкой или клеющей бумагой и инкубировать
планшет в течение 30 минут при температуре +37° С.

7.15. После окончания времени инкубации жидкость из лунок удалить
переворачиванием планшета или отсасыванием. Немедленно внести во все
лунки планшета по 300 мкл Промывочного буфера,после чего жидкость из
лунок вновь немедленно удалить переворачиванием планшета илм отсасыва-
нием. Процедуру повторить еще 4 раза. После последней промывки в лун-
ках не должно содержаться жидкости.

7.16. Во все используемые лунки планшета внести по 100 мкл раст-
вора Хромогена и инкубировать в течении 7-15 минут при температуре
+37° С в термостате.

7.17. Во все используемые лунки планшета к раствору Хромогена до-
бавить по 100 мкл Стоп-реагента для остановим ферментативной реакции.
Окраска стабильна в течении 30 минут.

7.18. Измерить оптическую плотность (ОП) всех лунок планшета на
фотометре вертикального сканирования при длине волны 450 нм не позднее
30 минут после остановки ферментативной реакции.

СХЕМА ВНЕСЕНИЯ ОБРАЗЦОВ

1 2 3 4

А Стандарт 0 Стандарт 0 z1 z1
В Стандарт 0,5 Стандарт 0,5 x2 x2
С Стандарт 1,5 Стандарт 1 ,5 y2 y2
d Стандарт 5,0 Стандарт 5,0 z2 z2
Е Стандарт 15,0 Стандарт 15,0 Хз Хз
f Стандарт 50,0 Стандарт 50,0 yз yз
g x1 x1 z3 z3
Н y1 y1 x. . . x. . .

и т.д.

8. РАСЧЕТЫ И ГРАФИЧЕСКИЕ ПОСТРОЕНИЯ

Оптическую плотность (ОП) субстратного раствора после остановки
Ферментативной реакции измеряют на спектрофотометре типа "Униплан"
или "Унискан" при длине волны 450 нм. Программное обеспечение прибора
позволяет получать результаты измерений в виде графического построения
калибровочной кривой и конечных концентраций тестостерона в анализиру-
емых образцах. При использовании приборов с отсутствием программного
обеспечения обработки результатов, необходимо провести графические
построения и расчеты концентраций тестостерона вручную. Для этого не-
обходимо:

а) Вычислить среднее арифметическое значение ОП лунок, содержащих
одни и те же стандарты или пробы: 1А и 2А ;1В и 2В;1С и 2С и т.д.

б) Разделить полученные значения ОП калиброванных стандартов и
неизвестных проб ( Вх ) на полученное значение ОП в О стандарте ( Во)
и умножить полученные величины на 100%

в) Построение калибровочной кривой.

Калибровочную кривую строят на полулогарифмической бумаге, откла-
дывая по оси абсцисс (логарифмическая ) концентрации тестостерона
(нг/мл), а по оси ординат (линейная) - полученные значения Вх /Во х
100% в калибровочных стандартах. Для определения содержания тестосте-
рона, в исследуемой пробе необходимо расчитать величину Вх/Во х100%
для данной пробы и по калибровочной кривой установить концентрацию
тестостерона. Типичная калибровочная кривая, полученная с использова-
нием набора ИфА-АФ-Тест представлена на рис.

г). Расчет Коэффициента выхода гормона (Кв)

Расчет проводится после определения конечных концентраций тестос-
терона в анализируемых образцах Хн,Хк,Хт (в нг/мл).

Хт - Хн

Кв= —————————

Хк - Хн

д). Расчет коэффициента неспецифического влияния компонентов ана-
лизируемых проб на специфическую реакцию связывания тестостерона анти-
телами.

Хк(нг/мл)

Кнесп. = --------------

30 (нг/мл) + Хн

Если Кнесп.> 1 , то это свидетельствует о наличии в образцах сте-
роидов или других соединений, ингибирующих специфическую реакцию.

ПРОДУКТЫ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИ,У КОТОРЫХ ЗНАЧЕНИЕ КНЕСП. ПРЕВЫ-
ШАЕТ 1.15 НЕ РЕКОМЕНДУЕТСЯ УПОТРЕБЛЯТЬ В ПИЩУ ДО ИДЕНТИФИКАЦИИ ОБНАРУ-
ЖЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ; ПРИ ЭТОМ НЕОБХОДИМО ИСКЛЮЧИТЬ НАЛИЧИЕ АНАБОЛИЧЕСКИХ
СТЕРОИДОВ (ТРЕНБОЛОНА И 19-НОРТЕСТОСТЕРОНА),СТИЛЬБЕНОВ (ДИЭТИЛСТИЛЬ-
БЭСТРОЛА, ГЕКСОЭСТРОЛА. ДИЕНОЭСТРОЛА) И КОРТИКОСТЕРОИДОВ (ДЕКСАМЕТА-
ЗОН, ФЛУМЕТАЗОН. В-МЕТАЗОН) В АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦАХ.

е). Расчет истинном концентрации гормона в анализируемом образце
(нг/мл):

Хн
Кист.= ——————————

kв x Кнесп.

ж). Расчет истинной концентрации гормона в 1 килограмме анализиру-
емого образца (мг/кг):

- Концентрация тестостерона в мг/кг продуктах из мяса, птицы, ры-
бы, расчитывается путем деления полученной величины Кист на 1000.

- Концентрация тестостерона в мг/кг жиров животного происхождения
расчитывается путем деления полученной величины Кист на 100.

- Концентрация тестостерона в мг/кг молока и кисломолочных про-
дуктов расчитывается путем деления полученной величины Кист на 3000.

ДОПУСТИМЫЕ УРОВНИ ТЕСТОСТЕРОЯА

Для всех вышеперечисленных продуктов допускается уровень тестос-
терона не более 0,015 мг/кг . В случае превышения уровня тестостерона
в анализируемом образце более, чем на 15%, данный продукт не рекомен-
дуется к употреблению в пищу.

9.АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

9.1. Диапазон измеряемого содержания общего тестостерона состав-
ляет 0,5 - 50,0 нг/мл.

9.2. Специфичность анализа. Перекрестная реакция антисыворотки к
тестостерону со структурно-родственными стероидами приведена в таблице 2

Таблица 2

Стероид Перекрестная реакция,%

Тестостерон 100
5-альфа-дигидротестостерон 18
Андростендиол 2,0
Андростендион 1,0
Андростерон 0,6
Днгндрозпиандростерон 0,09
Прогестерон 0,01
Эстрадиол 0,01
Эстриол 0,01
Кортизол 0,01
Прегненолон 0,01

9.3. Минимальное содержание тестостерона, определяемое с помощью
набора ИфА-Аф-Тест., составляет 0,3 нг/мл.

9.4. Тест на "линейность". Зависимость содержания тестостерона от
разведения калибровочных проб находится в диапазоне 85-115 %.

9.5. Воспроизводимость результатов. Коэффициент вариации резуль-
татов измерения содержания тестостерона в образцах,полученных с по-
мощью набора ИфА-Аф-Тест., не превышает 12 %.

9.6. Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора
ИфА-Аф-Тест уточнить значения содержания тестостерона, соответствующие
нормальным.

10. ПОРЯДОК ПРЕДСТАВЛЕНИЯ РЕКЛАМАЦИЙ

Рекламации на наборы реагентов для количественного определения
тестостерона в продуктах животного происхождения методом иммунофер-
ментного анализа направляют во Всероссийский государственный науч-
но-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации
ветеринарных препаратов (ВГНКИ) (123022, г. Москва, Д-22, Звенигородс-
кое шоссе, д.5), предприятию-изготовителю и в Центральную научно-мето-
дическую лабораторию (ЦНМВЛ) (111622,г. Москва, улица Оранжерейная,
дом 23) в соответствии с указанием ГУВ Минсельхоза России n 22-7/28 от
08.05.92 г. " О порядке предъявления рекламаций на ветпрепараты оте-
чественного производства и закупаемые по импорту"; одновременно с рек-
ламацией в адрес ВГНКИ направляют одну тест-систему.

Наставление разработано:

ТОО "М.А.В." (Н.Г. Матрешина, А.В. Матрешмн) и Центральной науч-
но-методической ветеринарной лабораторией (В.А. Седов).