МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА УТВЕРЖДАЮ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Начальник Управления ветеринарии ГЛАВНОЕ УПРАВЛЕНИЕ ВЕТЕРИНАРИИ n 13-7-2/191 29 января 1998 г. НАСТАВЛЕНИЕ по применению антигена кампилобактериозного для реакции агглютинации с вагинальной слизью (РАВС) 1.Общие положения 1.1. Антиген кампилобактериозный для реакции агглютинации с ваги- нальной слизью (РАВС) представляет собой непрозрачную серовато-белого цвета взвесь убитых формалином кампилобактеров с концентрацией 10 млрд. микробных клеток в 1 куб.см расфасованную в объеме по 5 куб.см в ампулы или по 5 -10 куб.см во флаконы. При отстаивании антигена на дно ампулы (флакона) выпа- дает осадок, который при встряхивании образует равномерную муть. 1.2. Срок годности антигена один год со дня изготовления при условии хранения его в сухом и темном месте при температуре от 4 до 12 гр.С. 2. Порядок применения антигена 2.1. Антиген применяют в ветеринарных лабораториях для диагностики кампилобактериоза крупного рогатого скота в реакции агглютинации с ваги- нальной слизью (РАВС). 2.2. Перед использованием антиген тщательно встряхивают. 2.3. Постановка РАВС. Антиген разводят формалинизированным (0,3 % - здесь и далее расчет по формальдегиду) З-х процентным раствором хлористого натрия в соотношении 1:10 (1+9). Тампон с вагинальной слизью помещают в пробирку с 5 куб.см З-х процентного раствора хлористого натрия, содержащего О,З процента формалина и выдерживают при температуре 1-4 гр.С в течение 12-14 ча- сов. Затем тампон отжимают пинцетом, а жидкость центрифугируют в течение 30 мин при 2,5-3 тыс об/мин. Реакцию ставят с надосадочной жидкостью (экстракт вагинальной слизи) в 4-х разведениях. В первую и вторую пробирки наливают по 0,5 куб.см экстракта вагинальной слизи. Причем, предварительно, во вторую, третью и четвертую пробирки вносят по 0,5 куб.см формалинизированного (0,3 %) З-х процентного раствора хлористого натрия. Содержимое второй пробирки пилотируют и в объеме 0,5 куб.см переносят в третью пробирку, из третьей, после идентичной манипуляции, в таком же объеме - в четвертую, из четвертой - в стакан с дезинфицирующей жидкостью. В каждую пробирку вносят по 0,5 куб.см антигена в рабочем разведении. 2.4. Контроль антигена Для контроля антигена на: - самоагглютинацию - в пробирку вносят 0,5 куб.см антигена и 0,5 куб.см формалинизированного (0,3 %) З-х процентного раствора хлористого натрия, - активность - в каждую пробирку с агглютинирующей сывороткой, по- лученной на культуру штамма кампилобактеров подвида венереалис, соответст- венно разведенной 1:50, 1:100, 1:200, 1:400 вносят по 0,5 куб.см антигена в рабочем разведении, - специфичность - в две пробирки вносят по 0,5 куб.см нормальной сыво- ротки в разведении 1:100 и 1:200 и добавляют по 0,5 куб.см антигена в рабочем разведении. Штативы с пробирками встряхивают и выдерживают в термостате при 37°С в течение 24 часов, а затем при комнатной температуре в течение 3-6 ча- сов и проводят учет реакции. 3. Учет реакции 3.1. Вначале учитывают результаты контролей антигена. Отрицательная реакция в первом и третьем контролях и положительная - во втором контроле свидетельствуют о правильности постановки реакции. 3.2. Учет результатов РАВС проводят с оценкой в крестах по следую- щей схеме: ++++ (4 креста) - полное просветеление жидкости над осевшим на дно пробирки агглютинатом, при встряхивании он разбивается на хлопья, жидкость остается прозрачной; +++ (3 креста) - слабая опалесценция жидкости над хорошо выражен- ным на дне пробирки агглютинатом, при встряхивании он разбивается на хло- пья, жидкость становится слегка мутноватой, ++ (2 креста) - заметное просветление жидкости, агглютинат умеренно выражен, при встряхивании он разбивается на мелкие хлопья, жидкость мутно- ватая, + (1 крест) - слабо заметное просветление жидкости, агглютинат едва выражен, при встряхивании он разбивается на небольшое количество мелких хлопьев, жидкость мутная, - (минус) - просветление жидкости и образование агглютината не реги- стрируется. Положительной считается реакция с оценкой на три-четыре креста в первой и второй или во всех пробирках. 4. Диагностическая оценка РАВС Данный метод диагностики кампилобактериоза крупного рогатого скота является ориентировочным. При получении положительной РАВС в благопо- лучном по кампилобактериозу хозяйстве животных необходимо исследовать бактериологическим методом. Диагноз на кампилобактериоз считается уста- новленнцм при выделении из патологического материала от крупного рогатого скота культуры кампилобактеров вида фетус-подвидов фетус и венереалис и вида еюни, каждой отдельно или в различных сочетаниях. 5. Порядок предъявления рекламаций В случае несоответствия препарата требованиям, указанным в настоящем наставлении, снижения активности или специфичности, применение данной се- рии антигена прекращают и в соответствии с указанием Главного управления ветеринарии Минсельхоза России от 8 мая 1992 года №22-7/28 "0 порядке предъявления рекламаций на ветпрепараты отечественного производства и за- купаемые по импорту", сообщают об этом Всероссийскому государственному научно-исследовательскому институту контроля, стандартизации и сертифика- ции ветеринарных препаратов (123022, Москва, Д-22, Звенигородское шоссе, 5 и предприятию - изготовителю. Одновременно в ВГНКИ направляют 3 ампулы (флакона) с антигеном.