МИНИСТЕРСТВО
СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА УТВЕРЖДАЮ
И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ Заместитель начальника
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Департамента ветеринарии
(Минсельхозпрод России) В.В.Селиверстов
ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ
23.05.97г. № 13-7-2/958
НАСТАВЛЕНИЕ
по применению сывороток
групповых агглютинирующих
лептоспирозных
1.Общие положения.
1.1. Сыворотки групповые агглютинирующие лептоспирозные пред-
назначены для определения серогрупповой принадлежности штаммов леп-
тоспир, используемых в качестве антигенов в реакции микроагглюти-
нации (РМА), и изолятов) выделенных из биологического материала.
1.2. Сыворотки выпускают в двух наборах и применяют с учетом
эпизоотической ситуации:
первый набор - сыворотки к лептоспирам 15 серогрупп: Гриппоти-
фоза, Помана, Иктерогеморрагия, Каникола) Тарассови, Батавия, Геб-
домадис, Сейро, Мини, Аутумналис, Пирогенес, Баллум, Аустралис,
Яваника, Циноптери (по одному флакону каждой сыворотки);
второй - к лептоспирам 24 серогрупп - сыворотки, перечисленные
в первом наборе, а также Целледони, Панама, Семаранга, Шермани,
Сармин , Луизиана, Диазиман , Манхао , Ранарум { по одному флакону ).
1.3.. Сыворотки выпускают в лиофилизированном виде, расфасован-
ньми во флаконы по 2 куб.см. По внешнего виду препараты имеют вид по-
ристой массы светло-розового цвета, легко растворимое в течение 2
минут в дистиллированной воде.
На флаконах с сывороткой должны быть этикетки с указанием: пол-
ного наименования препарата и серогруппы, номера серии, номера конт-
роля, даты изготовления, титра и объема сыворотки во флаконе. На
коробка с набором сывороток должна быть этикетка с указанием: наи-
менования и товарного знака предприятия-изготовителя, названия на-
бора, количества и перечня сывороток, входящих в него, номера серии,
номера контроля, объема сывороток, даты изготовления (месяц, год),
срока годности, условие хранения и обозначения ТУ. В каждую короб-
ку вкладывают наставление по применению препарата.
1.4. Срок годности набора 24 месяца при условии хранения в
сухом темном месте при температуре 2-15 гр.С.
1.5. При отсутствии маркировки (этикетки), нарушении целостности и
плотности укупорки флаконов, наличии посторонней примеси, изменении цвета,
консистенции содержимого, а также плохо растворяющиеся сыворотки к
использованию не пригодны.
2. Порядок применения
2.1. Диагностические и производственные штаммы лептоспир про-
веряют в реакции микроагглютинации (РМА) с пятнадцатью сыворотка-
ми, а культуры лептоспир, выделенные из биологического материала, -
с двадцатью четырьмя.
2.2. Флаконы с сывороткой перед постановкой РМА вскрывают и
в каждые добавляют 2 куб.см дистиллированной воды. Далее сыворотку
разводят физиологическим раствором по следующей схеме:
Номера пробирок
|
Количество (куб.см)
|
Разведение сыворотки
|
|
физиоло-
гического
раствора
|
сыворотки
|
до смеши-
вания с
антигеном
|
после сме-
шивания
с антигеном
|
1.
|
4,9
|
0,1 нативной
|
1:50
|
1:100
|
2.
|
4,.5
|
0,5 из разведения 1:50
|
1:500
|
1:1000
|
3.
|
2,5
|
2,5 из разведения 1:500
|
1:1000
|
1:2000
|
4.
|
2,5
|
2,5 из разведения 1:1000
|
1:2000
|
1:4000
|
5.
|
2,5
|
2,5 из разведения 1:2000
|
1:4000
|
1:8000
|
6.
|
2,5
|
2,5 из разведения 1:4000
|
1:8000
|
1:16000
|
7.
|
2,5
|
2,5 из разведения 1:8000
|
1:16000
|
1:32000
|
8.
|
2,5
|
2,5 из разведения 1:16000
|
1:32000
|
1:64000
|
2.3. Типируемая культура (штамм) должна быть 7-10-суточного
возраста с накоплением 60-100 подвижных лептоспир в поле зрения
микроскопа при увеличении 40 х 10 х 1,5 или 40 х 15.
2.4. Реакцию ставят на пластинах из органического стекла с
лунками, смешивая 0,1 куб.см сыворотки из каждого разведения с
0,1 куб.см типируемой культуры (антигена), при этом разведение
сыворотки удваивается (см. схему разведения п.2.2.).
Контролем служит смесь изучаемой культуры с физиологическим
раствором по 0,1 куб.см, в которой лептоспиры должны быть подвижны-
ми) без заметных изменений морфологии, признаков агглютинации и
лизиса.
Пластины, содержащие смесь компонентов, помещают в термостат
и выдерживают в течение часа при температуре 30-37 гр.С.
2.5. Реакцию учитывают под микроскопом с конденсором темного
поля при увеличении 20 х 10 х 1,5 или 20 х 15 и оценивают в крестах
по четырёхбалльной системе:
(++++)- агглютинированы 100% лептоспир;
(+++) - агглютинированы 75% лептоспир;
(++) - агглютинированы 50% лептоспир,
(+) - агглютинированы 25% лептоспир;
(-) - агглютинация отсутствует.
Испытуемую культуру относят к серологической группе лептоспир,
с сывороткой которой она дает реакцию на два-четыре креста не ме-
нее 50% ее титра.
Допустима реакция испытуемой культуры с гетерологичной сыво-
роткой не более 15% ее титра в реакции с гомологичной культурой.
2.6. Культуры лептоспир, не идентифицированные с помощью ука-
занных наборов, направляют во Всероссийский государственный науч-
но-исследовательский институт контроля, стандартизации и серти-
фикации ветеринарных препаратов (123022, Москва, Звенигородское
шоссе, 5; ВГНКИ) для дальнейшего изучения.
2.7. В случае несоответствия препарата требованиям, указан-
ным в настоящем наставлении, применение данной серии препарата
прекращают и, в соответствии с указанием Главного управления вете-
ринарии Минсельхоза России от 8 мая 1992 года №22-7/28 "О порядке
предъявления рекламаций на ветпрепараты отечественного производ-
ства и закупаемые по импорту", сообщают об этом предприятию-изго-
товителю. Всероссийскому государственному научно-исследовательс-
кому институту контроля, стандартизации и сертификации ветеринар-
ных препаратов и ЦНПВЛ.
2.8 При наличии невскрмтых наборов, один набор направляют в институт
(123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5; ВГНКИ), соблюдая режим,
указанный в наставлении по применению и хранению препарата.
С утверждением данного наставления на территории Российской
Федерации утрачивает силу "Наставление по применению набора сыво-
роток групповых агглютинирующих лептоспирозных", утвержденное ГУВ
14 января 1991 г.
Рекомендовано к регистрации в РФ Советом по ветеринарным пре-
паратам 18.12.96 г. Протокол №6 (ПВР 1.06.0299-96)