МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА УТВЕРЖДАЮ И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ Заместитель начальника РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Департамента ветеринарии (Минсельхозпрод России) В.В.Селиверстов ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ 27.05.97г. № 13-7-2/963 НАСТАВЛЕНИЕ по применению набора диагностикумов инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота 1. 0бщие положения 1.1. Набор диагностические препаратов предназначен для выявления и титрования антител к вирусу, инфекционного ринотрахеита. (ИРТ) в реакции нейтрализации (РН) в культуре клеток в сыворотке крови крупного рогатого скота, переболевшего ринотрахеитом или вакцинированного против этой инфекции идентификации (типирования) вируса ИРТ в реакции нейтрализации в культуре клеток и нммунофлуоресценции обнаружения антигена вируса ИРТ в патологическом материале от больных животных в реакции иммунофлуоресценции(РИФ). 1.2. Диагностический набор состоит из следующих компонентов: а) вируса инфекционного ринотрахеита (вакцинный штамм) для РН-2 ампулы; б) специфической к вирусу ИРТ сыворотки крови лошадей для РН -1 ампула; в) отрицательной (контрольной) сыворотки лошади для РН - 1 ампула; г) флуоресцирующего специфического глобулина лошади для РИФ- 3 ампулы; Д) флуоресцирующего отрицательного (контрольного) глобулина лошади сухого - 3 ампулы. 1.3. Вирус инфекционного ринотрахеита (вакцинный штамм), сыворотку специфическую лошади, сыворотку отрицательную (контрольную) лошади: выпускают - по(2.0+0,2)куб.см, а флуоресцирующие специфический и отрицательный глобулины лошади - по (0.5+0.1)куб.см, в лиофилизированном виде в ампулах, запаянных под вакуумом. 1.4.По внешнему виду компоненты набора представляют собой гомогенную аморфную массу желтовато-кремового цвета (вирус сыворотки) и желто-оранжевого цвета (глобулины). 1.5.На этикетках ампул с компонентами набора ИРТ указывают: название препарата, количество препарата в ампуле, номер серии, дату изготовления. 1.6. Ампулы укладывают в картонные коробки с наличием гнезд или перегородок, обеспечивающих неподвижность и целостность ампул. В каждую коробку вкладывают наставление по применению. 1.7. На каждую коробку с набором диагностикумов наклеивают этикетку, на которой указывают: наименование и товарный знак предприятия-изготовителя наименование набора, номер контроля, перечень компонентов, входящих в набор, количество ампул каждого компонентам количество препарата в ампуле, активность компонентов, номер серии, дату изготовления (месяц, год), срок годности, условия хранения и обозначение ТУ. 1.8. Наборы просматривают на соответствие маркировки и упаковки у ампулы - на целостностью на соответствие внешнего вида, цвета и наличие механических примесей. При несоответствии вышеуказанным требованиям ампулы с препаратом бракуют. 1.9. Набор диагностикумов инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота хранят в закрытых помещениях в сухом месте при темпе- ратуре от 2 до 8 гр.С. Срок годности набора при хранении в этих усло- виях - 24 месяца со дня изготовления. 2. Подготовка и применение. 2.1. Диагностикумы, имеющиеся в наборе, используют согласно "Методическим указаниям по лабораторной диагностике вирусных респи- раторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота". 2.2. Вирус инфекционного ринотрахеита /вакцинный/ для реакции нейтрализации, предназначенный для титрования антител в сыворотке крови, стерильно растворяют в 2 куб.см раствора Хенкса или среды для культур клеток /0,5%- ный гидролизат лактальбумина, № 199 или Игла/, а затем на том же растворе готовят рабочее разведение вирусам содержащее 1ОО ТЦД50 в 0,1 куб.см, исходя из титра, указанного на этикетке. Вирус должен растворяться в течение 1-2 минут. Разведенный ви- рус представляет собой гомогенную взвесь. Используют вирус в день разведения. Всю работу с вирусом инфекционного ринотрахеита прово- дят в условиях, исключающих рассеивание его в окружающую среду. Используемые пробирки, пипетки и пр. обеззараживают автоклавиро- ванием, кипячением 20-30 минут или химическим путем. 2.3. Сыворотки специфическую и отрицательную /контрольную/ ло- шади , предназначенные для идентификации вируса инфекционного рино- трахеита в реакции нейтрализации, стерильно растворяют в 2 куб.см раство- ра Хенкса или для культуры клеток /0,5%-ный гидролизат лактальбумина, № 199, или Игла/. Сыворотки должны растворяться в течение 1-2 минут, представляют собой гомегенную взвесь . Затем этим же раствором сыворотки разводят в соотношении 1:10 и прогревают на водяной бане при температуре 5б гр.С в течение 30 минут. 2.4. Флуоресцирующие глобулины специфический и отрицательный (контрольный) лошади, предназначенные для выявления антигена вируса ИРТ в мазках - отпечатках из тканей животных и со слизистых оболочек а также в зараженной культуре клеток, растворяют, в 0,5 куб.см стерильном физиологического раствора или дистиллированной воды. Флуоресцирующие глобулины растворяются в течение 1-2 минут, представляют собой гомо- генную взвесь желто-оранжевого цвета. Затем разводят их физиологичес- ким раствором до рабочего разведения, указанного на этикетке и окраши- вают исследуемые препараты. Сыворотки и флуоресцирующие глобулины после разведения можно хранить в условиях холодильника от 2 до 8 гр.С не более 24 часов. 3. В случае выявления неактивности диагностикумов или неспе- цифической реакции, применение данной серии диагностикума прекра- щают и в соответствии с указанием ГУВ Минсельхоза России от 8 мая 1992года "О порядке предъявления рекламаций на ветпрепараты оте- чественного производства и закупаемые по импорту", сообщают об этом предприятию-изготовителю во Всероссийский государственный научно- исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (123022, Москва , Звенигородское шоссе , 5 и ЦНПВЛ(116б22·Москва.ул.Оранжерейная.23). При наличии невскрытого набора один набор направляют в Институт, соблюдая режим, указанный в наставлении по применению и хранению препарата. С утверждением настоящего наставления на территории Российской Федерации утрачивает силу Наставление по применению набора диагностикумов инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, утвержденное ГУВ Госагропрома СССР 27 июля 1987 года. Рекомендовано к регистрации Госветбиокомиссией 20 октября 1995 года, протокол №4, ПВР 1.04.0116-95