МИНИСТЕРСТВО
СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
(Минсельхозпрод России)
ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ
УТВЕРЖДАЮ
27.01.97г. №13-7-2/836 Заместитель начальника
Департамента ветеринарии
НАСТАВЛЕНИЕ В.В.Селиверстов
по применению сыворотки
рожистой люминесцирующей сухой.
1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
1. 1. Сыворотка рожистая люминесцирующая сухая предназначена для
быстрого обнаружения и идентификации возбудителя рожи свиней в чистых,
смешанных культурах и патологическом материала.
1.2. Сыворотку расфасовывают по 1 мл в ампулы и упаковывают в
картонные коробки по 5-10 штук.
В каждую коробку вкладывают наставление по применению.
1. 3. На ампулу наклеивают этикетку на которой указывают: название сы-
воротки, объем сыворотки в ампулае, рабочее разведение, номер серии,
дату изготовления.
На каждую коробку с сывороткой наклеивают этикетку, на кото-
рой указывают: наименование и товарный знак предприятия-изготовителя,
полное название сыворотки, объем препарата в ампуле, рабочее разведе-
ние, дату изготовления (месяц, год), номер серии, номер контроля, срок
годности, условия хранения, обозначение ТУ.
1.4.Люминесцирующая рожистая сыворотка - высушенная лиофильным
способом глобулиновая фракция иммунной сыворотки, к которой присоеди-
нен флуорохром, представляет собой пористую массу желто-оранжевого
цвета, легко растворимую в воде.
1.5.Срок годности сыворотки 2 года при условии хранения ее в
темном месте при температуре от 4 до 10 гр.С. Сыворотки с истекшим сро-
ком годности можно применять, если они сохранили специфичность и вызы-
вают свечение гомологичных рожистых культур не ниже чем на три креста
в разведении 1:16.
1. 6. Ампулы с трещинами, без этикеток, разжиженной массой, меха-
ническими примесями к применению не пригодны.
2. ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ.
2. 1. Для работы сухую сыворотку в ампуле растворяют с соблюдением
стерильности дистиллированной водой до указанного на этикетке первона-
чального объема.
Затем содержимое ампулы переносят в стерильную пробирку и хранят
при температуре от 2 до 4 гр.С.
2. 2. Для получения рабочего разведения растворенную сыворотку до-
полнительно разводят в нужном объеме физиологического раствора хлорида
натрия с фосфатным буфером рН 7,4 до рабочего разведениям указанного
на этикетке ампул (рабочее разведение готовят в день проведения исследований).
2.3. При исследовании патологического материала (желательно
свежего), производят посевы на твердые и жидкие питательные среды,
а, затем стерильно вырезают кусочки паренхиматозных органов, из
которых готовят суспензию на физиологическом растворе хлорида нат-
рия в соотношении 1:5. После осаждения частиц в суспензии из раз-
ных участков ее поверхности готовят мазки.
2.4. Мазки из типичных для рожи колонн и, выращенных в течение
18-24 ч. на плотных средах или культур, полученных в жидких питатель-
ных средах, делают на тщательно обезжиренных предметных стеклах с
расчетом, чтобы в поле зрения микроскопа было около 100 клеток.
Площадь мазка (около 1 кв.см) обозначают восковым карандашом на
обратной стороне стекла. На одном стекле делают не более трех
мазков из разных культур или органов.
2.5. Мазки фиксируют метиловым спиртом (метанолом) 5 мин. или
этиловым спиртом (этанолом) 15 мин. и высушивают на воздухе. Мазки из
головного и костного мозга готовят отдельно и после фиксации спиртом
дополнительно обезжиривают ацетоном в течение: 5 мин при 2-3 кратном
смене его.
2.6. Перед окрашиванием препараты помещают строго горизонтально
на мостике во влажной камере (чашке Петри) для предупреждения высыха-
ния сыворотки.
На каждый мазок наносят 2-3 капли сыворотки в рабочем раз-
ведении и распределяют по всей поверхности мазка. Окрашивание препара-
та флуоресцирующей сывороткой длится 20 мин. при комнатной температу-
ре. Для лучшего окрашивания мазков стекла периодически покачивают.
Препараты промывают в течение 20 мин. физиологическим раствором
рН 7,4 со сменой раствора 4-5 раз.
Отмытые мазки ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на
воздухе.
2.7. На мазок наносят небольшую каплю смеси, состоящей из Э час-
тей глицерина и одной части 1/5 М фосфатного буфера рН 8,0, накрывают
покровным стеклом. Для иммерсии употребляют нефлуоресцирующее масло
или его заменитель, приготовленный из чистого диметилфтолата (100 мл)
и нафталина сублимированного (1,75 г) или тимола чистого (5 г).
2. 8. Мазки просматривают под люминесцентным микроскопом в сине-
фиолетовом спектре при увеличении 90х5.
2. 9. Окрашенные флюоресцирующей рожистой сывороткой бактерии име-
ют светящийся периферический контур (ободок). Это характерное свечение
контура оценивается визуально в крестах:
++++ - яркая, сверкающая зеленая люминесценция морфологически ти-
пичных бактерий с более интенсивной люминесценцией по их
периферии (положительная)
+++ - достаточно яркая зеленая люминесценция морфологически
типичных бактерий с более интенсивной
люминесценцией по их периферии (положительная)
++ - недостаточно яркая желтовато-зеленоватая люминесценция, пе-
риферический ободок выявляется с трудом (сомнительная)
+ - люминесценция очень слабая, морфология бактерий различается с
трудом (отрицательная )
- - люминесценция отсутствует, видны лишь тени бактерий
(отрицательная).
2.10. При обнаружении возбудителя с типичной морфологией, специфи-
ческим свечением интенсивностью не ниже, чем на три креста ставят по-
ложительный люминесцентно-серологический диагноз.
2.11. При сомнительном или отрицательном результате люминесцентной
микроскопии посевного материала проводят исследования культур и их
идентификацию общепринятыми методами.
3. При появлении неспецифических реакций или установлении слабой
активности сывороток применение их прекращают и в соответствии с ука-
занием Главного управления ветеринарии Минсельхоза Российской Федера-
ции от 8 мая 1992 года № 22-7/28 "О порядке предъявления рекламаций
на ветпрепараты отечественного производства и закупаемые по импорту",
сообщают об этом предприятию-изготовителю, Всероссийскому государс -
твенному научно-исследовательскому институту контроля стандартизации и
сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ, 1230022, Москва, Зве-
нигородское шоссе, 5) и Центральной научно-производственной ветери-
нарной лаборатории (ЦНПВЛ).
Одновременно с этим в адрес института направляют 4 ампулы данной серии.
С утверждением настоящего наставления на территории Российской
Федерации не действует Наставление по применению сыворотки рожистой
люминесцирующей сухой, утвержденное Главным управлением ветеринарии
МСХ СССР 2 апреля 1975 года.
Рекомендовано к регистрации Советом по ветеринарным препаратам
10.10.96г. Протокол №5, ПВР 1.05.0286-96.