Министерство сельского хозяйства и продовольствия РФ Департамент ветеринарии Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (ВНИТИБП) Методические рекомендации по определению степени флокуляции микробиоценоза активного ила в аэротенках УТВЕРЖДАЮ: Заместитель руководителя Департамента ветеринарии В.В.Селиверстов Директор: чл.-корр РАСХН А.Я. Самуйленко РАЗРАБОТЧИКИ: А.А. Денисов - ВНИТИБП И.Б. Павлова - ВНИИВСГЭ Е.М. Ленченко - МГУПБ М.Ю. Штукарева - МГУПБ Т.С. Богатырева - ВНИТИБП 1. Общие положения Одним из основных методов очистки и деконтаминации сточных вод является использо- вание микробиоценозов активного ила аэротенков, в которых оценку процесса очистки сточных вод можно проводить по показателю степени флокуляции. Предлагаемый метод предполагает изучение процессов флокуляции в микробиоценозе активного ила аэротенков не только на уровне световой микроскопии, но и с использо- ванием сканирующей электронной микроскопии (СЭМ). Использование СЭМ позволяет де- тально изучать механизм структурно-функциональных процессов, происходящих в исследу- емых сточных водах. Метод позволяет объективно проводить учет степени флокуляции и может быть использован в научно-исследовательских лабораториях и в производственных условиях. 2. Методика приготовления препаратов Для исследования степени флокуляции микробиоценоза активного ила аэротенков ис- пользуют чистые обезжиренные предметные стекла, предназначенные для исследований в световом микроскопе и покровные стекла, предназначенные для исследований в сканиру- ющем электронном микроскопе.Для погружения в сточную воду используют резиновую пробку, у которой с одной стороны делают прорезь для прикрепления предметного стекла, а с противоположной стороны пробки прикрепляют шнур или толстую нить. Приготовленные таким образом предметные стекла погружают в исследуемый объект на 2-4 ч (в зависи- мости от целей исследования). В случае исследования в сканирующем электронном микроскопе на поверхность пред- метного стекла, подготовленного вышеописанным способом, липкой лентой прикрепляют пок- ровные стекла.По истечении указанного времени предметные и покровные стекла помещают в чашки Петри и фиксируют парами 25 %-го глутарового альдегида в течение 30-40 мин. Для световой микроскопии можно окрасить препараты по Граму, или метиленовой синью или парами 1-2 %-го водного раствора четырехокиси осмия в течение 3-5 мин. 3. Исследование препаратов в световом микроскопе После вышеописанной обработки флокулы и отдельные микроорганизмы (бактерии, грибы, микроводоросли, простейшие и др.) четко дифференцируются в их естественном расположении. При этом готовые препараты получаются контрастными, артефактов не наблюдается и сохраняется архитектоника взаиморасположения флокул и свободно взвешенных микроорганизмов. Для изучения степени очистки сточных вод препараты исследуют под световым микроскопом. На предметных стеклах подсчитывают число флокул и определяют средний показатель флокуляции (СПФ). СПФ оценивают по показателям: при обнаружении от 0 до 10,0 флокул - СПФ считают нулевым, от 10,0 до 20,0 -низким, от 20,0 до 40,0 - средним, от 40 и выше - высоким, соответственно степень очистки сточной воды считают плохой, низкой, средней, высокой. 4. Исследование препаратов с помощью сканирующего электронного микроскопа. Для исследования в сканирующем электронном микроскопе препараты на покровных стеклах просматривают под световым микроскопом, затем откалывают маленький кусочек покровного стекла, который был отмечен при просмотре в световом микроскопе, и помещают его на объектодержатель. Препараты напыляют золотом или платиной на напылительной установке и просматривают участки препаратов в сканирующем электронном микроскопе.