Продолжение

11. Проведение анализа.

11.1. Подготовка аппаратуры.
Хромато-масс-спектрометрическую систему готовят к работе в соответствии   с   
инструкцией   по   эксплуатации.   Проверяют функционирование ГХ-МС системы, 
вводя в инжектор хроматографа растворитель или контрольный образец, и оценива-
ют общую чувствительность прибора, фон, наличие эффектов "памяти" и артефактов.

11.2. Условия проведения анализа.
В связи с тем, что в настоящее время не существует капиллярных колонок, спо-
собных разделить все изомеры, в ряде случаев анализ проводят в два этапа. Сначала, 
применяют неполярную колонку типа se-54. Если обнаруживают: 1,2,3,7,8,9-ГкХДД; 
2,3,7,8-ТХДФ; 2,3,4,7,8-ПеХДФ; 1,2,3,4,7,8-ГкХДФ, то ту же пробу анализируют на 
полярной колонке, например, sp2331, для определения именно этих изомеров.

Анализ проводят по температурной программе, подобранной в процессе предва-
рительных опытов, таким образом, чтобы обеспечить отделение определяемых 
ПХДД и ГТХДФ от других изомеров в наилучшей степени. Эффективность разделе-
ния хроматографической системы перед каждой серией, но не реже одного раза в не-
делю, должна экспериментально подтверждаться вводом в ГХ-МС стандартной сме-
си изомеров ТХДД (п.4.5). Эффективность разделения достаточна при соблюдении 
следующего условия для любой пары изомеров:
                            2h/(h1+h2)<0,7,
где h1, Н2 - высоты неразрешенных пиков, h - высота долины между ними.

Для колонки с  неподвижной  фазой db-5, например, можно рекомендовать сле-
дующую температурную программу: начальная температура термостата 120° С, ско-
рость подъема температуры 20° С/мин до 240 гр.С, с 240 гр.С до 270 гр.С -20 С/мин и вы-
держка при этой температуре до выхода всех компонентов. Температура инжектора и 
интерфейса 250 гр. С. Температура источника ионов масс-спектрометра -250гр.С, энер-
гия ионизирующих электронов - 50-70 эВ. Условия получения масс-спектров могут 
быть и другими в зависимости от типа масс-спектрометра и условий его юстировки. 
Необходимым условием является величина чувствительности системы ГХ-МС, кото-
рая должна обеспечивать регистрацию не менее 10 пг 2,3,7,8 ТХДД при отношении 
сигнал/шум равным 3.

Определяют времена удерживания 2,3,7,8-замещенных ПХДД и ПХДФ и внут-
ренних стандартов, вводя несколько раз контрольную смесь диоксинов, содержащую 
определяемые 2,3,7,8-замещенные ПХДД и ПХДФ, измеряя в каждом опыте времена 
удерживания и рассчитывая их  средние значение  и  доверительные   интервалы. 
Времена удерживания зависят от типа колонки и условий работы.

Относительные времена удерживания некоторых ПХДД на двух разных непод-
вижных фазах (полярной и неполярной) приведены в табл.2.

                                                                    Таблица 2.
   Относительные времена удерживания 2,3,7,8 замещенных ПХДД и ПХДФ.         

№
п/п

Соединение

Неподвижная фаза

Наполярная
ultra-2

Полярная
sp-2331

1

1,2,3,4-ТХДД

0,99

1,02

2

2,3,7,8-ТХДД

1,00

1,00

3

1,2,3,7,8-ПеХДД

1,23

1,40

4

1,2,3,4,7,8-ГкХДД

1,46

2,08

5

1,2,3,6,7,8-ГкХДД

1,47

1,94

6

1,2,3,7,8,9-ГкХДД

1,50

2,15

7

1,2,3,4,7,8-ГпХДД

1,76

2,98

8

ОХДД

2,17

4,50

9

2,3,7,8-ТХДФ

0,96

0,96

10

1,2,3,7,8-ПеХДФ

1,18

1,31

11

2,3,4,7,8-ПеХДФ

1,22

1,35

12

1,2,3 Т,4,7,8-ГкХДФ

1,39

2,01

13

1,2,3,6,7,8-ГкХДФ

1,39

2,03

14

2,3,4,6,7,8-ГкХДФ

1,43

2,07

15

1,2,3,7,8,9-ГкХДФ

1,48

2,09

16

1,2,3,4,6,7,8-ГпХДФ

1,61

2,83

17

1,2,3,4,7,8,9-ГпХДФ

1,74

2,96

18

ОХДФ

2,12

4,45

11.3. Получение градуировочной зависимости для определяемых компонентов.

Во флаконы, плотно закрывающиеся пробками, вместимостью 1 куб.см вводят 
дозатором по 0,095 куб.см стандартных растворов А, Б, В, Г и Д и добавляют с помо-
щью микрошприца по 0,095 куб.см стандартного раствора
13
 С12-2,3,7,8-ТХДД   (или   набора   изотопномеченых   внутренних стандартов) с   
концентрацией   1 мкг/куб.см. По 0,001 куб.см каждого раствора вводят микрошпри-
цем в инжектор газового хроматографа в режиме splitless или on-column). Регистри-
руют масс-хроматограммы для ионов с массами, указанными в табл.3.

С помощью системы обработки данных находят градуировочную зависимость 
между отношением площади хроматографического пика каждого определяемого ком-
понента на масс-хроматограммах для одного или обоих регистрируемых изотопных 
ионов к площади пика на масс-хроматограмме соответствующего иона внутреннего 13 
стандарта от концентрации, например, для 2,3,7,8-ТХДД и внутреннего стандарта С12-2,3,7,8-ТХДД 
определяют зависимость от концентрации 2,3,7,8-ТХДД отношения площадей хроматографических 
пиков для ионов 320/332, 322/334.

Градуировочная зависимость считается приемлемой, если все точки находятся в 
доверительном интервале, соответствующем 95%-й доверительной вероятности.


                                                               Таблица 3.
     Массы регистрируемых ионов и соотношение площадей их пиков на 
                          масс-хроматограммах.

Соотношение
   площадей

11.4. Получение масс-хроматограмм.

Отбирают микрошприцем 0,001 куб.см анализируемого раствора и вводят в ин-
жектор газового хроматографа в режиме splitless или on-column. Регистрируют ион-
ные масс-хроматограммы для   ионов, соответствующих определяемым ПХДД и 
ПХДФ и используемым внутренним стандартам (табл.3).

ПРИМЕЧАНИЯ
1. При использовании масс-спектрометра низкого разрешения регистрируются 
ионы с соответствующими номинальными массами, например, вместо 319,897 - 320 и 
т.д.

2. Для обеспечения большей достоверности результатов желательно регистриро-
вать большее число ионов для каждого соединения, а при использовании   масс-
спектрометрии   низкого   разрешения   это необходимо; в качестве   дополнительных 
ионов для регистрации желательно выбирать как изотопы молекулярных ионов, так и
                        +
осколочные ионы (М-СОС1).

12. Вычисление результатов измерений.

По окончании анализа с помощью системы обработки данных фиксируют на 
масс-хроматограммах пики в области времен удерживания, соответствующих выходу 
2,3,7,8-замещенных ПХДД и ПХДФ и внутренних стандартов.

Вычисляют отношение площадей хроматографических пиков на масс-
хроматограммах ионов ml и М2, регистрируемых для каждого определяемого соеди-
нения и внутреннего стандарта, и сравнивают его с теоретическим значением, приве-
деным в табл.2. Это отношение должно быть в пределах +-15% от теоретического 
значения, например, для ТХДД - от 0,65  до  0,89 (теоретическое отношение равно 
0,77). Если хроматографические пики в указанной области времен удерживания 
имеются, но отношение площадей пиков выходит за эти пределы, то говорить о по-
ложительной идентификации по этим пикам ПХДД или ПХДФ в данной пробе нель-
зя, и требуется дополнительный анализ (на хроматографической колонке с другой 
неподвижной фазой, с ионизацией отрицательными ионами или с применением тан-
демной масс-спектрометрии) или же повторный анализ после дополнительной очист-
ки на колонке с активированным углем и на колонке с окисью алюминия. Если время 
удерживания данного компонента совпадает с временем    удерживания    соответст-
вующего    изотопномеченого внутреннего стандарта (отличается от него не более 
чем на 1 с или на 1 скан) или отличается от времени  удерживания, измеренного для 
стандартного образца, не более, чем на 0,01% и отношение площадей пиков находит-
ся в указанных пределах, то этот компонент в данной пробе считается идентифици-
рованным.

Измеряют площади пиков на масс-хроматограммах в указанной области. Оцени-
вают эффективность извлечения ПХДД и ПХДФ по площадям пиков, соответствую-
                                                13   
щих введенным меченым стандартам. Например, для  С12-2,3,7,8-ТХДД эффектив-
ность извлечения Е рассчитывается по формуле:
                                                        asck
                                                  Е=--------------* 100% ,
                                                        akcs

где as - площадь пика на масс-хроматограмме иона m/z 332 или 334 для внут-
                           13
реннего стандарта-имитатора С12-2,3,7,8-ТХДД (в единицах счета интегратора); Аk- 
                                      13
площадь пика для внутреннего стандарта С12-1,2,3,4-ТХДД (в единицах счета инте-
                                                          13
гратора),   ck - количество введенного стандарта-имитатора С12-2,3,7,8-ТХДД (пг), 
                                               13
cs-количество введенного внутреннего стандарта  С12-1,2,3,4-ТХДД (пг)..
Концентрацию обнаруженных компонентов xi определяют по формуле:
                                  АiРs

                                      17
                                xi= ——— ki,
                                    asp
где Сi - концентрация i-ro определяемого компонента, пг/г, Аi -площадь хромато-
графического пика (в единицах счета интегратора) на масс-хроматограмме иона, ре-
гистрируемого для определения данного соединения (табл.1), as - площадь хромато-
графического пика на масс-хроматограмме стандарта-имитатора (в единицах счета 
интегратора), ps - количество добавленного к пробе стандарта-имитатора в пг, Р - 
масса анализируемой пробы, г, Кi - градуировочный коэффициент, соответствующий 
данному отношению ai/as на градуировочной зависимости.

Расчет проводят по масс-хроматограммам либо для одного из двух ионов ml или 
М2, указанных в табл.2, либо для двух ионов с усреднением результатов, либо по 
сумме площадей соответствующих пиков на обеих масс-хроматограммах.

Конечный результат анализа представляют следующим образом:
                        Х ± d, пг/г, Р= 0.95
где d - значение характеристики погрешности, рассчитанное по формуле
d = 0,01 * d * x (x - содержание определяемого компонента в пробе), значения d 
приведены в таблице 1.

Результат представляют также в диоксиновых эквивалентах (ДЭ) путем умноже-
ния значений концентраций определяемых компонентов на соответствующие коэф-
фициенты, приведенные в Приложении 1.

13. Контроль погрешности результатов измерений.

13.1. Контроль правильности детектирования.

Для доказательства правильности детектирования при каждом определении не-
обходимо:
- для каждого из определяемых ПХДД, ПХДФ и для внутренних стандартов ре-
гистрировать не менее двух масс-хроматограмм по двум ионам ml и М2 с массами, 
соответствующими изотопам молекулярного иона. Хроматографические пики на 
двух масс-хроматограммах для ионов ml и М2, соответствующие каждому опреде-
ляемому ПХДД, ПХДФ и внутреннему стандарту, должны быть синхронными;

- относительные времена удерживания хроматографических пиков ПХДД и 
ПХДФ (по отношению к внутреннему стандарту) не должны отличаться от измерен-
ных для стандартных образцов ПХДД и ПХДФ более, чем на 0,01%, а в случае ис-
пользования соответствующего изотопномеченого внутреннего стандарта - не более 
чем на 1 с или на 1 скан от времени удерживания внутреннего стандарта;

-отношение площадей хроматографических пиков на парных масс-
хроматограммах ионов ml и М2, регистрируемых для каждого определяемого компо-
нента и внутреннего стандарта должно быть в пределах =Ь15% от теоретического, 
приведенного в табл.3;

- отношение сигнала к шуму для каждого измеряемого хроматографического пика 
должно быть не менее 3:1;

- интервал эффективности извлечения ПХДД и ПХДФ, определяемый по отноше-
     13                         13
нию: С12-2,3,7,8-ТХДД /С12-1,2,3,4-ТХДД, должен быть в пределах 25%- 150%.

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости.

Оперативный    контроль    воспроизводимости    проводится периодически, через 
каждые 10-20 проб. Образцами контроля являются реальные пробы. Для анализа от-
бирают две параллельные пробы и анализируют в точном соответствии с прописью 
методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два ре-
зультата анализа, используя разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. 
В работе должны участвовать два аналитика. Оперативный контроль воспроизводи-
мости проводят путем сравнения результата контрольной процедуры dk, равного 
расхождению двух результатов измерений (первичного -x1 и повторного - Х2) со-
держания компонентов в одной и той же пробе, с нормативом оперативного контроля 
воспроизводимости - d.

Воспроизводимость    контрольных    измерений,    а    также воспроизводимость 
результатов измерений рабочих проб, получаемых за период, в течение которого ус-
ловия проведения анализа принимают стабильными и соответствующими условиям 
проведения контрольных измерений, признают удовлетворительной, если

                           dk=|x1 - x2|<d,  

где d = 0.01 * doтн * x (x - среднее арифметическое значение первичного и по-
вторного результатов измерений). Значения doтн приведены в таблице 4.

При    превышении    норматива    оперативного    контроля воспроизводимости   
эксперимент   повторяют.   При   повторном превышении указанного норматива выяс-
няют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устра-
няют их.

                                                                  Таблица 4.
   Значения   норматива   оперативного   контроля   случайной составляющей 
относительной погрешности (воспроизводимости) при доверительной вероятности Р=0,95

Диапаозон измеряемых
содержаний 2,3,7,8-замещенных
полихлорированных дибензо-п-
диоксинов и дибензофуранов, нг/кг

Норматив оперативного
контроля воспроизводимости,
dотн, % (для двух результатов
измерений м=2)

от 0,5 до 10 вкл.

                    94

св.10 до 200 вкл.

                   61

св. 200 до 1000 вкл.

                   36

13.3. Оперативный контроль погрешности.

Оперативный контроль погрешности проводят периодически раз в три месяца, а 
также при изменении условий анализа (применении новой партии   реактивов или 
новых стандартных образцов, изменении характеристик прибора и т.п.).

Образцами для оперативного контроля погрешности являются искусственные 
смеси, близкие по составу к анализируемым пробам, нанесенные на образец, не со-
держащий ПХДД и ПХДФ. Каждый приготовленный таким образом   образец анали-
зируют в точном соответствии с прописью методики.

Алгоритм оперативного контроля погрешности с использованием метода доба-
вок состоит в сравнении результата контрольной процедуры kk, равного разности 
между результатом контрольного измерения пробы с добавкой Х, пробы Х и величи-
ной добавки - С, с нормативом оперативного контроля погрешности Кд.

Норматив оперативного контроля погрешности рассчитывают по формулам:
- при проведении внутрилабораторного контроля (Р = 0.90)

Кд==0.84Ц----------------------    
                  (dxЭ)2 +               нг/кг                     
                   (dx)2,

- при проведении внешнего контроля (Р = 0.95))
Кд=Ц---------------------------
                 2
            (dxЭ)  +               нг/кг                     
             (dx)2,


где dx, dхэ (нг/кг) - значения характеристики погрешности (без учета знака), со-
ответствующие содержанию определяемого компонента в пробе с добавкой, соответ-
ственно:

dx = 0,01 * dx * Х (x -содержание определяемого компонента в пробе);

dxЭ == 0,01 * dx * x' (x' - содержание определяемого компонента в пробе с до-
бавкой).

Значения dx и dx- приведены в таблице 4.

Точность контрольных измерений, а также точность результатов измерений ра-
бочих проб, получаемых за период, в течение которого условия   проведения   анали-
за   принимают   стабильными   и соответствующими условиям проведения кон-
трольных измерений, признают удовлетворительной, если:

kk = зx' -Х-С з < Кд

При превышении норматива оперативного контроля погрешности эксперимент 
повторяют с использованием другой пробы. При повторно превышении указанного 
норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам 
контроля, и устраняют их. 

ПРИМЕЧАНИЯ:

1. Образцы для контроля анализируют в одной серии с реальными текущими рабо-
чими пробами.

2. Результаты контроля могут быть распространены на результаты анализа реаль-
ных проб при условии, что массовые концентрации определяемых компонентов кон-
трольной и реальной проб находятся в пределах одного и того же диапазона концентра-
ций (диапазоны концентраций регламентированы табл. 1, 4 и 5 настоящей методики).

                                                                Приложение 1 
                                                                Обязательное
               Форма представления результатов анализа.
  Наименование организации, проведший анализ. Номер аттестата аккредитации.

                    ПРОТОКОЛ № ____от"___"__________
                      количественного химического анализа
полихлорированных дибензо-п-диоксинов и дибензофуранов. 
Краткое описание пробы (шифр; наименование и характеристики пробы и условий 
пробоотбора).

Методика КХА

Определяемый
   компонент,
2,3,7,8-ПХДД и
      ПХДФ

Диоксиновый
  эквивалент,
       ДЭ

Результат анализа

Концентрация, пг/г

Концентрация
в ДЭ, пг/г

2,3,7,8-ТХДД

1

1,2,3,7,8-ПеХДД

0,5

1,2,3,4,7,8-ГкХДД

0,1

1,2,3,6,7,8-ГкХДД

0,1

1,2,3,7,8,9-ГкХДД

0,1

1,2,3,4,6,7,8-ГпХДД

0,01

ОХДД

0,001

2,3,7,8-ТХДФ

0,1

1,2,3,7,8-ПеХДФ

0,05

2,3,4,7,8-ПеХДФ

0,5

1,2,3,4,7,8-ГкХДФ

0,1

1,2,3,6,7,8-ГкХДФ

0,1

2,3,4,6,7,8-ГкХДФ

0,1

1,2,3,7,8,9-ГкХДФ

0,1

1,2,3,4,6,7,8-ГпХДФ

0,01

1,2,3,4,7,8,9-ГпХДФ

0,01

ОХДФ

0,001

Другие ТХДД

Другие ТХДФ

Другие Пе ХДД

Другие ПеХДФ

Другие ГкХДД

Другие ГкХДФ

Другой ГпХДД

Другие ГпХДФ

                                                       13
Предел обнаружения по С12-2,3,7,8-
ТХДД,пг/г

Суммарная концентрация в ДЭ, пг/г

Относительная погрешность
определения,%

Подпись ответственного исполнителя.

Примечание: допустимо представление другой, дополнительной информации 
по характеристикам проб, пробоотбору и результатам анализов.